Fluorescenční sonda rhodamin-fluoresceinového typu pro stanovení pH

Fluorescenční sondy fluoresceinového a rhodaminového typu se často používají ke studiu různých biologických procesů doprovázených změnou intracelulárního pH. Tyto biologické procesy se mohou týkat nukleových kyselin, specifických proteinů atd. Fluorescein poskytuje intenzivní zelenou fluorescenci (excitace/emise 495/512 nm) při alkalickém a neutrálním pH. Rhodamin naopak vykazuje intenzivní červenou fluorescenci (excitace/emise 563/572 nm) při kyselém pH. Přímé spojení obou indikátorů pak umožnilo stanovit změnu fluorescence fluoresceinu a rhodaminu při dvou vlnových délkách excitace/emise. Poměr intenzit fluorescenčních maxim je pak v určité oblasti pH lineární.

Indikátory rhodaminového a fluoresceinového typu jsou oblíbené zejména díky dobré biokompatibilitě a vysoké citlivosti za fyziologických podmínek. Potenciál sond obsahujících fluorescein i rhodamin byl prokázán u systému, v němž byly fluorescein a rhodamin spojeny diethylaminovým linkerem. Tato sloučenina byla úspěšně použita ke stanovení pH v mitochondriích. Vyvinutý indikátor složený z fluoresceinu i rhodaminu má dvě excitační maxima – při 494 nm a 566 nm – s emisí při 515 nm, resp. 585 nm. Poměr emisí závisí na změně pH a je lineární v rozmezí pH 6,6–7,8.

►možnost stanovení pH s vysokou přesností dosahující 0,1 pH
►nezávislost naměřených hodnot na množství indikátoru
►chemická stabilita
►schopnost pronikat do živých buněk Hlavní nevýhodou stávajících sloučenin je v současnosti zejména jejich složitá a časově náročná syntéza. Popsaný systém tento faktor eliminuje díky syntéze na pevné fázi, která umožňuje efektivní vyhodnocení nejvhodnějších substrátů.

CZ 30104